XSL0003 免疫熒光（冰凍-單標(biāo)）

免疫熒光

免疫熒光技術(shù)又稱為熒光抗體技術(shù)，將熒光標(biāo)記技術(shù)和免疫學(xué)方法結(jié)合起來，利用抗原抗體相互作用從而對組織或細(xì)胞內(nèi)的 抗原或抗體物質(zhì)進(jìn)行定位、示蹤、定性以及相對定量等。

實驗意義

1.免疫熒光技術(shù)特異性強(qiáng)、敏感性高、反應(yīng)速度快、結(jié)果清晰明確，在臨床檢驗和科學(xué)研究工作上有很高的應(yīng)用價值。

2.操作簡便，便于推廣。

實驗步驟

1.石蠟切片免疫熒光：

①烘箱內(nèi)進(jìn)行烘片，然后將切片進(jìn)行常規(guī)脫蠟至水；

②抗原修復(fù)：使用水浴鍋或電爐煮沸熱修復(fù)，或者中檔微波修復(fù)，緩沖液為0.01M檸檬酸鈉緩沖液（pH6.0）；

③去除內(nèi)源性酶：3%H2O2室溫孵育10 min阻斷內(nèi)源性過氧化物酶的活性后，PBS清洗3次×3 min；

④封閉：5~10%正常血清封閉30 min；

⑤一抗孵育：稀釋好的一抗4℃孵育過夜，PBS清洗3次×3 min；

⑥二抗孵育：將稀釋好的帶熒光標(biāo)記的二抗，搖床緩慢孵育1 h，PBS清洗3次×3 min；

⑦DAPI復(fù)染核，PBS清洗3次×3 min；

⑧封片：Mounting Medium封片，凝固后拍照。（多重?zé)晒馊旧嚎墒褂镁G色熒光、紅色熒光和藍(lán)色熒光進(jìn)行三重?zé)晒馊?色）。

2.冰凍切片免疫熒光：

①新鮮組織經(jīng)處理后，立即在恒冷冰凍切片機(jī)內(nèi)切片，厚度為5~6 μm；

②防脫玻片，貼片，室溫陰干約12 h；

③4℃純丙.酮10 min處理，風(fēng)干；

④PBS漂洗3次×10 min；

⑤0.3%Trion-100溶液37℃3次×10min； ④PBS漂洗3

次×5 min；

⑥去除內(nèi)源性酶；封閉，一抗孵育、二抗孵育、復(fù)核染、封片等與石蠟切片的處理類似，同樣也可做多重?zé)晒馊旧?/span>

結(jié)果展示

免疫熒光（冰凍-單標(biāo)）

實驗完成周期及交付標(biāo)準(zhǔn)

1. 實驗周期：1-2周

2. 交付標(biāo)準(zhǔn)：蠟塊、切片、熒光圖片、半定量分析、實驗報告（實驗步驟、試劑、儀器等）

需確認(rèn)的信息

1. 是做石蠟切片還是冰凍切片（推薦做石蠟切片）

2. 樣本的種屬和類型，是組織還是細(xì)胞？

3. 樣本的數(shù)量

4. 是否提供一抗，我方可代購

5. 半定量分析要求

6. 拍照要求

免疫熒光（冰凍-單標(biāo)） 

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