抗體人源化服務
非人源性抗體進入人體內(nèi)會引起機體嚴重的排異反應，例如鼠源單克隆抗體進入人體會產(chǎn)生人抗鼠抗體反應 (Human anti-mouse antibody response, HAMA response)，進而影響抗體在臨床應用時的安全性和治療效果。抗體人源化是將動物源抗體通過基因工程操作及重組表達，使抗體的大部分序列或者全部序列變成人源的序列，在抗體親和力和特異性的基礎上，更大程度上降低抗體的免疫原性。義翹神州利用CDR置換技術(shù)及計算機輔助結(jié)構(gòu)模擬設計可對羊駝納米抗體、鼠源單抗進行人源化改造，人源化程度 >95%，為客戶提供優(yōu)質(zhì)的單克隆抗體人源化服務。
服務特色
抗體人源化服務內(nèi)容
客戶提供
1. 親本抗體序列。
2. 抗原蛋白：純度>90%，濃度>1mg/mL, 緩沖液為PBS或其他經(jīng)義翹評估對檢測無影響的。
抗體人源化服務流程
抗體人源化服務案例
鼠源單克隆抗體人源化服務案例
如下圖所示，經(jīng)過人源化改造的抗體，親和力和親本單抗相當。
| Affinity kinetic analysis |
| Sample | KD(M) | Kon(1/Ms) | Kdis(1/s) | Full R^2 |
| Parental mouse Ab | 1.74E-10 | 3.30E+05 | 5.74E-05 | 0.9963 |
| Humanizied clone 1 | 2.83E-11 | 1.73E+05 | 4.89E-06 | 0.999 |
| Humanizied clone 2 | 4.31E-11 | 2.16E+05 | 9.30E-06 | 0.998 |
| Humanizied clone 3 | 4.85E-11 | 2.17E+05 | 1.05E-05 | 0.9982 |
納米抗體人源化服務案例
納米抗體經(jīng)人源化改造后，親和力較親本抗體相當。
| Affinity kinetic analysis |
| Sample | KD(M) | Ka(1/Ms) | Kd(1/s) . |
| Parental VHH | 1.04E-08 | 1.33E+05 | 0.001379 |
| Humanized VHH 1 | 9.72E-09 | 1.14E+05 | 0.001104 |
| Humanized VHH 2 | 8.30E-09 | 1. .29E+05 | 0.001072 |
| Humanized VHH 3 | 9.26E-09 | 1.05E+05 | 0.000972 |
抗體人源化服務常見問題解答
如何避免抗體人源化后親和力下降？ 在人源化程度的同時注意對抗體構(gòu)象起到穩(wěn)定作用的氨基酸殘基的保留。同時義翹神州可提供親和力成熟服務，利用人工智能（AI）驅(qū)動的抗體親和力成熟平臺和高通量重組抗體表達平臺，可以快速且高-效地進行篩選。經(jīng)篩選和驗證，抗體親和力可提升103倍。
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什么是抗體人源化？ 自單克隆抗體發(fā)布以來，鼠源性的單抗在臨床及治療上發(fā)揮了巨大的作用。但鼠源抗體對人而言有較強的免疫反應，會產(chǎn)生人抗鼠抗體反應（Human anti-mouse antibody response, HAMA response），影響鼠源單抗在臨床上應用的安全性及治療效果。而為了解決這個問題，我們通過基因改造，使鼠源抗體具有與人體內(nèi)抗體類似的結(jié)構(gòu)，從而逃避免疫系統(tǒng)的識別，避免誘導HAMA反應，這個過程我們稱之為抗體人源化。
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人源化抗體的篩選基于哪些評估準則？ 1、哺乳細胞蛋白表達系統(tǒng)（HEK293或CHO）進行瞬時表達的表達水平。 2、基于檢測指標EC50（通過ELISA或FACS檢測）或Kd（通過Biacore或Octet檢測），將人源化抗體結(jié)合力與鼠源抗體和嵌合抗體結(jié)合力進行對比。 3、基于體外生物活性測試，將人源化抗體活性與鼠源抗體和嵌合抗體活性進行對比。 4、基于體外結(jié)合試驗，檢測人源化抗體與相關(guān)同源物種的交叉反應性。 5、基于生物物理性質(zhì)分析，將人源化抗體與鼠源抗體和嵌合抗體進行對比。
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95%的人源化程度，是指可變區(qū)的人源化程度，還是包括恒定區(qū)的全長抗體人源化程度？ 95%的人源化程度，是指可變區(qū)的人源化程度，其抗體恒定區(qū)本來就是人源的。義翹神州利用CDR置換技術(shù)及計算機輔助結(jié)構(gòu)模擬設計可對鼠源單抗等進行人源化改造，人源化程度 >95%，可提供PTM和聚集性預測報告，為客戶提供優(yōu)質(zhì)的單克隆抗體人源化服務。
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人源化步驟里，回復突變具體做了什么工作？ 在3D結(jié)構(gòu)建模后需確定關(guān)鍵氨基酸殘基，回復突變是將影響構(gòu)象、或與抗原結(jié)合的氨基酸突變回鼠源氨基酸。
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影響人源化抗體表達量降低的因素有哪些？要注意哪些設計？ 人源化抗體表達量降低一般是抗體形成了聚集，需要注意對疏水氨基酸的改造。
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