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逆轉(zhuǎn)錄實(shí)驗(yàn)做不好，是不是引物出了問題？
實(shí)驗(yàn)室常用到的實(shí)驗(yàn)：逆轉(zhuǎn)錄實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)人員通過體外模擬病毒復(fù)制過程，以提取的RNA為模板，使用逆轉(zhuǎn)錄酶催化，合成出與RNA互補(bǔ)的cDNA鏈。終構(gòu)建cDNA文庫，并從中篩選所需的靶標(biāo)基因。BUT！小伙伴們做逆轉(zhuǎn)錄實(shí)驗(yàn)時(shí)，1）有沒有深究過RNA逆轉(zhuǎn)錄出的cDNA能不能真實(shí)反映出基因表達(dá)信息？2）做實(shí)驗(yàn)時(shí)，有沒有發(fā)生過內(nèi)參做的很好，目的基因做不出的情況？如果有發(fā)生上述情況，那么需要重新評估逆轉(zhuǎn)錄實(shí)驗(yàn)結(jié)果的有效性。逆轉(zhuǎn)錄結(jié)果有效性的評定逆轉(zhuǎn)錄實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性的評定重要的是盡可能反映樣本中原始RNA模板的信息， -
HB190313測序數(shù)據(jù)不好？是不是建庫出了問題？！——從測序數(shù)據(jù)看文庫構(gòu)建高通量測序中的文庫構(gòu)建指的是在DNA兩端連接特定的接頭從而使其符合測序平臺要求的過程，在高通量測序過程中，文庫質(zhì)量直接影響終測序數(shù)據(jù)的質(zhì)量，打個(gè)比方，如果文庫上機(jī)測序的濃度很低，樣本在FlowCell上擴(kuò)增所形成的DNA樣本簇就會很少，測序數(shù)據(jù)量也將減少，這就可能導(dǎo)致測序失敗，所以我們說文庫的質(zhì)量控制和質(zhì)量評估也是NGS中的關(guān)鍵步驟。文庫如何質(zhì)控？評估文庫質(zhì)量的方法有哪些？n文庫質(zhì)控：文庫在上機(jī)之前都有會進(jìn)行質(zhì)量檢測，質(zhì)
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這有一份FFPE樣本建庫的檔案，還不趕緊Pick?什么是FFPE？FFPE（Formalin-FixedａndParrffinEmbedded），即福爾馬林固定石蠟包埋樣本。由于這種處理方法能夠較長時(shí)間地保存組織或制備檢驗(yàn)所需的組織標(biāo)本，所以在臨床病理檢驗(yàn)、腫瘤基因檢測中應(yīng)用廣泛。在世界范圍內(nèi)，大約有數(shù)十億份組織樣品保存在醫(yī)院或者組織樣品庫中，其中絕大多數(shù)是使用福爾馬林固定石蠟包埋的方法處理的樣品。FFPE樣本通常代表了珍貴且來源廣泛的生物醫(yī)學(xué)研究材料，為闡明疾病機(jī)制、回顧性研究等提供了寶貴的資
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系統(tǒng)介紹鏈脲佐菌素（STZ）誘導(dǎo)的糖尿病疾病模型
翊圣生物提供高成功率糖尿病建模用STZ：純度≥98%（HPLC測定）。產(chǎn)品名稱貨號規(guī)格*（元）Streptozocin鏈脲佐菌素60256ES60100mg156.00Streptozocin鏈脲佐菌素60256ES76500mg386.00Streptozocin鏈脲佐菌素60256ES801g676.00文章包含以下知識點(diǎn)1.STZ誘導(dǎo)糖尿病模型的構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)SOP2.STZ誘導(dǎo)糖尿病模型建模效果評估指標(biāo)3.STZ誘導(dǎo)糖尿病模型的失敗原因解析4.STZ誘導(dǎo)小/大鼠死亡率高的原因解析5.糖尿病建模 -
什么是DNA甲基化DNA甲基化（DNAmethylation）是DNA化學(xué)修飾的一種形式，能夠在不改變DNA序列的前提下改變遺傳表現(xiàn)。DNA甲基化是指在DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶的作用下，在基因組CpG二核苷酸的胞嘧啶5'碳位共價(jià)鍵結(jié)合一個(gè)甲基基團(tuán)。DNA甲基化的結(jié)果，一般是使甲基化位點(diǎn)的下游基因表達(dá)量變少。圖1：DNA甲基化原理圖為什么研究DNA甲基化DNA甲基化是早發(fā)現(xiàn)的基因表觀修飾方式之一，可能存在于所有高等生物中。DNA甲基化在維持細(xì)胞正常功能、傳遞基因組印記、胚胎發(fā)育、腫瘤發(fā)生等方面發(fā)揮重要作
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小分子化合物專題一、信號通路信號通路是指當(dāng)細(xì)胞里要發(fā)生某種反應(yīng)時(shí)信號從細(xì)胞外到細(xì)胞內(nèi)傳遞了一種信息，細(xì)胞要根據(jù)這種信息來做出反應(yīng)的現(xiàn)象。信號通路（signalpathway）的提出早可追溯到1972年，不過當(dāng)時(shí)被稱為信號轉(zhuǎn)換（signaltransmission）。1980年M.Rodbell在一篇綜述中提到信號轉(zhuǎn)導(dǎo)（signaltransduction），此后該概念就被廣泛使用了。信號通路是指能將細(xì)胞外的分子信號經(jīng)細(xì)胞膜傳入細(xì)胞內(nèi)發(fā)揮效應(yīng)的一系列酶促反應(yīng)通路。這些細(xì)胞外的分子信號（稱為配體，l
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新品速遞---“一步法”建庫試劑盒-----HieffNGS®OnePotDNALibraryPrepKitforIllumina®?產(chǎn)品背景：DNA文庫的構(gòu)建是二代測序前期的核心環(huán)節(jié)。目前市面上推廣的建庫試劑盒主要有常規(guī)建庫試劑盒以及轉(zhuǎn)座酶法快速建庫試劑盒。常規(guī)試劑盒需要購買單獨(dú)的片段化模塊或者采用機(jī)械法進(jìn)行片段化，機(jī)械法片段化對DNA分子有一定的損傷，影響文庫質(zhì)量。轉(zhuǎn)座酶法試劑盒都是針對特定InputDNA量的樣本進(jìn)行建庫，并且存在一定的偏好性，影響測序質(zhì)量。HieffNGS®OnePotD
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如何定量低豐度目的基因的表達(dá)（含詳細(xì)解決方法）有時(shí)候，qPCR實(shí)驗(yàn)會成為阻礙你課題順利開展的強(qiáng)勢攔路虎！看似簡單的基因表達(dá)量差異驗(yàn)證，當(dāng)遇到低豐富表達(dá)的基因時(shí)，也許就舉步維艱。模板獲取困難導(dǎo)致的RNA提取量少或RNA質(zhì)量不佳，即使選蕞佳的試劑、篩選出良好的引物，也有可能qPCR定量得到的內(nèi)參基因CT值在18-20個(gè)cycle，而目的基因在31-35個(gè)循環(huán)。遇到這種情況，你是怎么解決的呢？qPCR在低豐度表達(dá)基因定量中的局限性基因的豐度是指基因在基因組中的拷貝數(shù)?？煞譃楦哓S度，中等豐度和低豐度。低
