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  • 如何定量低豐度目的基因的表達(dá)

    如何定量低豐度目的基因的表達(dá)（含詳細(xì)解決方法）有時(shí)候，qPCR實(shí)驗(yàn)會(huì)成為阻礙你課題順利開展的強(qiáng)勢(shì)攔路虎！看似簡(jiǎn)單的基因表達(dá)量差異驗(yàn)證，當(dāng)遇到低豐富表達(dá)的基因時(shí)，也許就舉步維艱。模板獲取困難導(dǎo)致的RNA提取量少或RNA質(zhì)量不佳，即使選蕞佳的試劑、篩選出良好的引物，也有可能qPCR定量得到的內(nèi)參基因CT值在18-20個(gè)cycle，而目的基因在31-35個(gè)循環(huán)。遇到這種情況，你是怎么解決的呢？qPCR在低豐度表達(dá)基因定量中的局限性基因的豐度是指基因在基因組中的拷貝數(shù)?？煞譃楦哓S度，中等豐度和低豐度。低

  • 一文全面解析NGS接頭的奧秘

    NGS測(cè)序技術(shù)近年來得到了巨大發(fā)展，2017年摩根大會(huì)上，Illumina重磅推出NovaSeq測(cè)序儀，NovaSeq可以2天產(chǎn)生2Tb數(shù)據(jù)，通量是10年前GenomeAnalyzer的2000倍。測(cè)序通量的大幅增加，意味著更多的樣本混合上機(jī)，這樣的話我們?nèi)绾卧诿Ｃ?shù)據(jù)中找到對(duì)應(yīng)樣本匹配的數(shù)據(jù)呢？人們想到了一種在文庫構(gòu)建時(shí)在接頭上添加“接頭暗號(hào)”的方法，在測(cè)序完成之后根據(jù)“接頭暗號(hào)”對(duì)樣本進(jìn)行分離。這里的接頭暗號(hào)就是樣本標(biāo)簽“Index/Barcode”。本文將以建庫過程中要添加的接頭為核心，對(duì)

  • dsDNA HS Assay Kit for Qubit®數(shù)據(jù)測(cè)評(píng)

    行走江湖靠的就是實(shí)力dsDNAHSAssayKitforQubit®數(shù)據(jù)測(cè)評(píng)——簡(jiǎn)便、靈敏、準(zhǔn)確、穩(wěn)定dsDNAAssayKitforQubit®是Yeasen生物開發(fā)的專門用于Qubit®熒光儀或熒光酶標(biāo)儀的試劑盒，線性范圍0.2-100ng，即使在存在ssDNA、RNA和單體核苷酸的條件下，也可以選擇性的檢測(cè)dsDNA，且耐受較高濃度的蛋白質(zhì)、鹽類、洗滌劑等污染物。產(chǎn)品名稱產(chǎn)品編號(hào)規(guī)格儲(chǔ)存dsDNAHSAssayKitforQubit®12640ES60100T2-8℃dsDNAHSAssa

  • 文獻(xiàn) | Molecular Plant: 解密水稻半矮桿與應(yīng)用之謎

    文獻(xiàn)|MolecularPlant:解密水稻半矮桿與應(yīng)用之謎倒伏是影響水稻高產(chǎn)穩(wěn)產(chǎn)的主要限制因素之一。自20世紀(jì)60年代以來，以作物矮化育種為標(biāo)志的“綠色革命”主要是利用赤霉素合成基因SD1的突變體，培育半矮稈性狀，提高作物（水稻）的抗倒伏能力，使水稻產(chǎn)量得到了大面積的顯著增加。經(jīng)過多年研究，雖然在水稻中發(fā)現(xiàn)了超過60個(gè)基因可以導(dǎo)致半矮稈性狀，但這些基因除影響莖稈長(zhǎng)度還影響其它農(nóng)藝性狀，難以應(yīng)用于培育抗倒伏品種。目前，SD1的突變?nèi)匀皇桥嘤景氚捫誀畹闹饕颉Ｓ捎趩我坏目捎没颍沟狗誀?/div>

  • 淺談DNA磁珠的作用原理

    作為DNA分選磁珠的生產(chǎn)廠商，我們zui經(jīng)常被客戶問到的問題就是：高通量測(cè)序（NGS）文庫制備時(shí)，DNA磁珠為什么可以用來純化和分選文庫？在這里我們整理相關(guān)的資料，對(duì)這個(gè)問題做簡(jiǎn)單的闡述。分選磁珠的作用原理是基于一種固相載體可逆化固定（SPRI）的分離純化方法。磁珠體系中一般包含：磁珠、DNA、聚乙二醇（PEG）、以及鹽離子等，在一定濃度的PEG和鹽離子環(huán)境中，DNA可吸附到羧基修飾的高分子磁珠表面（即固相載體），該過程是可逆的，在適當(dāng)條件下，結(jié)合的DNA分子可以被洗脫回收。納米級(jí)別的磁珠表面性

  • Western Blot快速實(shí)驗(yàn)攻略

    一、WesternBlot實(shí)驗(yàn)原理蛋白免疫印跡（WesternBlot，WB）是將蛋白質(zhì)經(jīng)電泳分離后轉(zhuǎn)移到膜上，然后利用抗體進(jìn)行檢測(cè)的技術(shù)。完整的WB流程，如下圖所示，包含樣本制備、SDS-PAGE、轉(zhuǎn)膜、抗體結(jié)合、蛋白檢測(cè)等5個(gè)大步驟。二、試劑準(zhǔn)備詳見文末附錄。三、實(shí)驗(yàn)步驟1.樣本制備1）融解RIPA裂解液，混勻。取適當(dāng)量的裂解液，在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入PMSF，使PMSF的zui終濃度為1mM。2）貼壁細(xì)胞：去除培養(yǎng)液，用PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍。按照6孔板每孔加入150-250μ

  • RIPA裂解液，讀這些就夠了！

    1.什么是RIPA裂解液？RIPA裂解液（RadioImmunoprecipitationAssayLysisbuffer，放射免疫沉淀法裂解緩沖液）是一種傳統(tǒng)的可用于裂解細(xì)胞或組織的快速裂解液，其原理為利用表面活性劑等裂解細(xì)胞膜（包括核膜），從組織或細(xì)胞中抽取可溶性蛋白。RIPA裂解液裂解后得到的蛋白一般可直接用于常規(guī)的WB、IP、co-IP等實(shí)驗(yàn)。2.RIPA裂解液里有什么？RIPA裂解液的配制方法有很多種，主要包括裂解成分、蛋白酶抑制劑和磷酸酶抑制劑三種組分。裂解成分可通過破壞細(xì)胞膜和蛋白

  • Benzonase Nuclease高活力核酸酶

    BenzonaseNuclease高活力核酸酶——消滅核酸，拒絕污染1.前言核酸污染是生物樣本制備中常常遇到的問題。在蛋白純化的過程中，如果您提取的蛋白粘度很高、蛋白純化的得率很低、蛋白檢測(cè)的結(jié)果很差，那么您的樣本可能遭受了核酸污染。如何去除核酸？超聲法和DNase/RNase酶法是常用的方法，但存在諸多缺陷（表1）。表1核酸去除，超聲法與DNase/RNase酶法優(yōu)缺點(diǎn)超聲法DNase/RNase酶法優(yōu)點(diǎn)利用剪切力可在一定程度上降解核酸利用核酸內(nèi)切酶活性，可在溫和條件下，較好的消化核酸缺點(diǎn)僅能
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