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OverExpressC43(DE3)大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞
產(chǎn)品信息：
組成 BC210-01 BC210-02
OverExpressC43(DE3) 10×100?l 20×100?l
pUC19 質(zhì)粒 5?l 5?l
儲(chǔ)存條件：-70℃保存，避免反復(fù)凍融。不適合在液氮中保存。
產(chǎn)品介紹：
OverExpressC43(DE3)菌株適用于毒性蛋白的表達(dá)，來源于OverExpressC41(DE3)菌株。OverExpress C41(DE3)是通過毒性蛋白
在BL21(DE3)內(nèi)過表達(dá)篩選實(shí)驗(yàn)得到的基因突變菌株,該菌株的基因突變降低了T7 RNA聚合酶的酶活性，下調(diào)毒性蛋白的表達(dá)量使
細(xì)胞存活。OverExpress C43(DE3)菌株是通過另一個(gè)毒性蛋白對(duì)OverExpress C41(DE3)菌株再次進(jìn)行毒性耐受性實(shí)驗(yàn)獲得的，
OverExpress C43(DE3)菌株比OverExpress C41(DE3)更加耐受毒性蛋白。OverExpress C43(DE3)菌株也可以表達(dá)常規(guī)蛋白，相同條件
下，蛋白表達(dá)量略低于BL21(DE3)菌株。OverExpressC43(DE3)菌株屬于B菌株，lon和ompT蛋白酶缺陷型。OverExpress C43(DE3)
感受態(tài)細(xì)胞由特殊工藝制成，pUC19質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率可達(dá)1×10 7 cfu/μg DNA。
基因型：F -ompT hsdSB (rB -mB -) gal dcm (DE3)
菌株抗性：對(duì)氨芐，，和四環(huán)素敏感。
質(zhì)粒轉(zhuǎn)化步驟：（以氨芐抗性的 pET 質(zhì)粒為例）
1. 將感受態(tài)細(xì)胞置于冰水浴中化凍。待細(xì)胞剛化凍后，加入 1-5μl 含有 1-100ng 的質(zhì)粒 DNA 到細(xì)胞中，用手指管底，輕
輕混勻。
2. 冰水浴中放置 30 分鐘，不要晃動(dòng)。
3. 42℃熱擊 60 秒鐘，不要晃動(dòng)。
4. 冰水浴中放置 2 分鐘，不要晃動(dòng)。
5. 加入 500μl 的室溫的 SOC 或 LB 培養(yǎng)基。
6. 置于 37℃搖床中，150-200rpm，復(fù)蘇培養(yǎng) 60 分鐘。
7. 取 50-100μl 菌液涂布在含有氨芐抗性的 LB 平板上。待液體吸干后，倒置平板 37℃培養(yǎng) 12-24 小時(shí)。
（平板劃線分離法：復(fù)蘇培養(yǎng)結(jié)束后，12000rpm 離心 30 秒鐘，棄掉上清，留 100μl 左右的液體，用 200μl 吸頭輕輕吹打散菌塊，
取 10μl 重懸的菌液分多點(diǎn)滴在平板上，傾斜吸頭，用吸頭頭部的側(cè)面將滴在平板上的液體來回劃線。這個(gè)方法可以獲得更多更
大的單克隆菌落。）
蛋白表達(dá)步驟：
1. 挑取單菌落，接種到含 5ml 帶抗生素的 LB 培養(yǎng)基中。
2. 37℃，200rpm 震蕩培養(yǎng)細(xì)菌至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期（OD600=0.4-0.8）。
3. 加入 IPTG 到終濃度為 0.4mM，37℃誘導(dǎo) 4 小時(shí)或 16℃誘導(dǎo)過夜。（可以設(shè)定不同濃度的 IPTG 來誘導(dǎo)表達(dá)）
4. 誘導(dǎo)完成后，離心收集菌體，用合適的方法（如考馬斯亮藍(lán)染膠法，Western-Blot法或酶活性分析法）分析菌體裂解物的總
蛋白、上清和沉淀組分，明確表達(dá)產(chǎn)物的表達(dá)狀況（可溶性或不溶性表達(dá)）。
5. 重組蛋白大量表達(dá)時(shí)，可用 10ml 過夜培養(yǎng)物轉(zhuǎn)接到 1L 培養(yǎng)基中，當(dāng)培養(yǎng)到 OD600=0.4-0.8 時(shí)，加入終濃度為 0.4mM 的 IPTG，
37℃誘導(dǎo) 4 小時(shí)或 16℃誘導(dǎo)過夜（不同蛋白表達(dá)的條件有所不同，需在實(shí)驗(yàn)中優(yōu)化）。


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抗體：兔多抗、鼠單抗種類豐富，一抗 1 萬余種，二抗 100 多種；
重組蛋白：多項(xiàng)發(fā)明，原核表達(dá)系統(tǒng)穩(wěn)定表達(dá)蛋白 1000 余種。


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