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構(gòu)建載體2023/5/5
構(gòu)建載體最關(guān)鍵的一步就是設(shè)計引物引入酶切位點，一旦引物設(shè)計好，那接下來就非常簡單了，今天重點就來教教大家如何利用snapgene輕松獲得構(gòu)建載體所需的引物序列。1.打開軟件，選擇第一個（紅線標記），然...
引物設(shè)計原則2023/5/5
1）擴增產(chǎn)物長度100bp-150bp為佳；2）引物長度17bp-25bp最好；3）正向引物和反向引物的Tm值最好相差不要超過1℃。Tm值調(diào)整至60℃-65℃為佳；4）引物的GC含量控制在40%-60...
PCR 操作中必知的 6 大細節(jié)2023/5/5
1、最好使用一次性進口tip頭，以避免液體殘留；同時，tip頭不要長時間暴露于空氣中，避免氣溶膠的污染。2、加樣時，tip頭要伸入PCR反應(yīng)管的液面下一點，然后將液體緩緩打入液面下，至恰好打出一個小氣...
PCR 引物設(shè)計2023/5/5
好的引物會讓PCR實驗成功一半，因而，引物設(shè)計一直都是PCR非常重要的環(huán)節(jié)。經(jīng)典之法就是讓Premier5攜手oligo，共同設(shè)計PCR引物。1、以小鼠的IL-17為例，進入NCBI界面,選擇Nucl...
PCR 產(chǎn)物純化2023/4/21
材料與儀器TE或去離子水PCR產(chǎn)物離心機和轉(zhuǎn)子PCR濾件微量離心管步驟一、材料1.緩沖液和溶液TE(lOmmol/LTris-HCl，lmmol/LEDTA，pH7.5)或去離子水2.核酸和寡核苷酸待...
DNA 污染的柱上去除2023/4/21
材料與儀器DNA酶I緩沖液DNA酶I細胞裂解液步驟一、材料1.酶和酶緩沖液DNA酶I，擴增級（無RNA酶）DNA酶I緩沖液，10X2.細胞和組織利用總RNA純化試劑盒（例如Madigen總RNA快速純...
冷凍組織及切片的準備2023/4/21
材料與儀器1、新鮮的組織2、丙酮蒸餾水干冰磷酸鹽緩沖液（PBS)TekOCT組織復(fù)合物3、封閉容器燒杯恒冷裝置解剖工具平盤組織模子載玻片刀片步驟一、材料1.緩沖液、溶液和試劑丙酮蒸餾水干冰磷酸鹽緩沖液...
單鏈 cDNA 的合成2023/4/21
材料與儀器步驟一、材料1.緩沖液、溶液和試劑去除RNA酶的雙蒸水10XRT-PCR緩沖液（去除RNA酶的雙蒸水，100mmol/LTris-HCl、pH8.3，500mmol/LKC1,15mmol/...
從有限的細胞中提取 RNA2023/4/21
材料與儀器LCM帽子乙醇糖原RNA提取試劑盒超純水移液器步驟一、材料1.緩沖液、試劑和溶液75%乙醇(超純水配制）糖原，5mg/ml(Ambion，Austin，TX)StratageneRNA提取試...
細胞融合的方法及誘導(dǎo)物2023/4/19
同種細胞在培養(yǎng)時2個靠在一起的細胞自發(fā)合并，稱自發(fā)融合;異種間的細胞必須經(jīng)誘導(dǎo)劑處理才能融合，稱誘發(fā)融合。仙臺病毒法融合①兩種細胞在一起培養(yǎng)，加入病毒，在4℃條件下病毒附著在細胞膜上。并使兩細胞相互凝...
大腸桿菌質(zhì)粒DNA的提取2023/4/19
實驗方法原理堿法提取主要是利用共價閉合環(huán)狀質(zhì)粒與線性染色質(zhì)在拓撲學上的差異來分離它們。在堿性pH環(huán)境，DNA變性，當恢復(fù)中性并在高鹽離子濃度時，絕大多數(shù)質(zhì)粒DNA可以準確復(fù)性，留在上清中；而線性染色體...
蛋白酶活性檢測方法2023/4/19
1定義1g固體酶粉(或1mL液體酶)，在一定溫度和PH值條件下，1min水解酪素產(chǎn)生1ug酪氨酸為一個酶活力單位，以(u/mL)表示。2福林法(第一法)2、1原理蛋白酶在一琿的溫度與PH條件下，水解底...
植物蛋白質(zhì)組學和糖基化2023/4/19
1.前言與其他真核細胞一樣，植物細胞中，糖基化通常發(fā)生在分泌蛋白質(zhì)上，雖然在細胞質(zhì)蛋白和核蛋白上也發(fā)現(xiàn)一些糖基化反應(yīng)。根據(jù)寡糖部分和蛋白質(zhì)骨架之間的連接方式，可將糖基化分為兩種類型：N-糖基化和O-糖...
標記抗體的應(yīng)用技術(shù)2023/4/12
原理ELISA是以免疫學反應(yīng)為基礎(chǔ)，將抗原、牽9體的特異性反應(yīng)與酶對底物的高效催化作用相結(jié)合起來的一種敏感性很高的試驗技術(shù)。由于抗原、抗體的反應(yīng)在一種固相載體──聚苯乙烯微量滴定板的孔中進行，每加入一...
B 淋巴細胞膜表面免疫球蛋白的檢查2023/4/12
原理SmIg是B細胞的抗原識別受體，也是B細胞特異的表面標志，用直接免疫熒光法可檢查出SmIg。用熒光素標記的抗Ig抗體，在一定條件下與淋巴細胞混合，熒光素標記的抗Ig抗體可以與B細胞表面的Ig結(jié)合，...
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