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cDNA文庫構(gòu)建2021/12/20
原理cDNA文庫是指某生物某發(fā)育時期所轉(zhuǎn)錄的全部mRNA經(jīng)反轉(zhuǎn)錄形成的cDNA片段與某種載體連接而形成的克隆的集合。經(jīng)典cDNA文庫構(gòu)建的基本原理是用Oligo(dT)作逆轉(zhuǎn)錄引物，或者用隨機(jī)引物，給...
乙醇沉淀法2021/12/17
原理DNA溶液是DNA以水合狀態(tài)穩(wěn)定存在，當(dāng)加入乙醇時,乙醇會奪DNA周圍的水分子，使DNA失水而易于聚合。一般實(shí)驗(yàn)中,是加2倍體積的無水乙醇與DNA相混合,其乙醇的最終含量占67%左右。因而也可改用...
測定用乙醇固定的 DNA 的含量2021/12/17
原理DNA和RNA在260nm處有一很高的吸收峰，利用這個原理我們測其OD260，再推算出其濃度。材料與儀器細(xì)胞樣品PBS緩沖液70%乙醇PI液離心機(jī)恒溫箱篩網(wǎng)步驟一、培養(yǎng)細(xì)胞的DNA含量的測定制備單...
BSP克隆測序法2021/12/17
材料與儀器【材料】DNA目標(biāo)片段；【試劑】亞硫酸氫鹽；步驟基因組DNA制備亞硫酸氫鹽修飾DNA純化與回收PCR擴(kuò)增產(chǎn)物克隆測序注意事項1、組織樣本：-20℃或-80℃低溫冰箱中保存，液氮或者干冰運(yùn)輸；...
變性RNA在膜上的轉(zhuǎn)移和固定2021/12/17
原理多數(shù)情況下，為檢測特定的靶mRNA，需先將RNA通過瓊脂糖電泳分離后，再從膠上轉(zhuǎn)移到二維支持物上，（通常用尼龍膜)，再與持異的標(biāo)記探針雜交。正如在Nonhem雜交中討論的情況，實(shí)驗(yàn)者可采用多種試劑...
哺乳動物 DNA 的快速分離2021/12/17
原理根據(jù)本方案制備的哺乳動物DNA約20~50kb，適于作PCR反應(yīng)的模板。DNA產(chǎn)量在0.5到3.0μg/mg組織之間變化，或者是5~15μg/300μl全血。材料與儀器無DNase的RNase蛋白...
哺乳動物細(xì)胞抽提物中熒光素酶的測定實(shí)驗(yàn)2021/12/16
原理螢光素酶是理想的報告基因，因?yàn)椴溉閯游锛?xì)胞中不含內(nèi)源性螢光素酶，一旦轉(zhuǎn)錄完成立刻就生成功能性的螢光素酶，同時在所有的化學(xué)發(fā)光反應(yīng)中，它的光產(chǎn)物具有最高的量子效率，檢測靈敏度高。熒光素酶報告基因被廣...
薄層層析法測定氯霉素?；D(zhuǎn)移酶含量實(shí)驗(yàn)2021/12/16
材料與儀器用攜帶感興趣DNA的pCAT載體轉(zhuǎn)染的哺乳動物培養(yǎng)細(xì)胞CAT反應(yīng)混合物1乙基乙酸裂解緩沖液不含鈣鹽和鎂鹽的磷酸鹽緩沖液薄層層析（TLC)溶劑Tris-Cl放射性墨水干冰乙醇浴不溶于乙醇的墨水...
BAL31 核酸酶消化法產(chǎn)生雙向缺失突變體實(shí)驗(yàn)2021/12/16
材料與儀器BAL31緩沖液EGTA乙醇酚氯仿醋酸鈉蔗糖凝膠上樣緩沖液TE噬菌體T4DNA聚合酶BAL31核酸酶大腸桿菌DNA聚合酶IKlenow片段限制性內(nèi)切酶瓊脂糖凝膠用于凝膠電泳的DNA分子量標(biāo)準(zhǔn)...
人生長激素的放射免疫分析法2021/12/16
材料與儀器hGH表達(dá)質(zhì)粒洗滌液親和素包被珠試管γ計數(shù)儀步驟1.取轉(zhuǎn)染了hGH表達(dá)質(zhì)粒的哺乳動物細(xì)胞的培養(yǎng)液100~500μl。2.加100μl培養(yǎng)液或標(biāo)準(zhǔn)品至12mm×75mm圓底試管中。加入100μ...
CAT活性的相-抽提分析法2021/12/16
材料與儀器轉(zhuǎn)染細(xì)胞氯霉素Tris·ClTMPD二甲苯離心機(jī)離心管培養(yǎng)箱步驟一、來源于哺乳動物細(xì)胞1.按“CAT活性的層析分析法”中的步驟1~5的凍融法，制備哺乳動物細(xì)胞提取物。如果用胰蛋白酶消化或制細(xì)...
含甲酰胺的測序膠2021/12/15
原理聚丙烯酰胺凝膠加人甲酰胺可以使造成條帶壓縮的測序產(chǎn)物的二級結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定。材料與儀器DNA甲酰胺甲醇乙醇TEMEDSDS電泳儀步驟1.按基本方案步驟1~5組裝凝膠平板夾層。2.按所需濃度配制甲酰胺凝膠...
電解質(zhì)梯度測序膠 簡介2021/12/15
原理通過簡單地提高下槽緩沖液的鹽濃度，使凝膠底部的離子強(qiáng)度得以提高，在電泳過程中，鹽離子可以電泳進(jìn)入凝膠并產(chǎn)生重復(fù)性好的及有效的梯度。材料與儀器DNATBE乙酸鈉電泳儀步驟1.按基本方案步驟1~22灌...
變性聚丙烯酰胺凝膠的制備實(shí)驗(yàn)2021/12/15
材料與儀器丙烯酰胺溶液過硫酸銨水溶液去離子水去污劑乙醇KOH甲醇溶液聚硅氧烷溶液TBE電泳緩沖液TEMED尿素彈簧夾干膠架封膠帶膠板（配對的）和隔板手套凡士林保護(hù)性的工作合紙鯊魚齒梳子有臂的燒瓶隔板注...
原位裂解細(xì)胞的CAT分析法2021/12/15
材料與儀器轉(zhuǎn)染細(xì)胞Triton裂解液培養(yǎng)皿培養(yǎng)箱步驟1.60mm培養(yǎng)皿中轉(zhuǎn)染了CAT表達(dá)質(zhì)粒的細(xì)胞，用2mlPBS洗1次。每培養(yǎng)皿加入2ml低滲緩沖液，在室溫下溫育2~5min。2.吸去低滲緩沖液，加...
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