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免疫組化IHC實驗經(jīng)驗總結(jié)2022/3/15
1、免疫組化實驗所用的組織和細胞標本有哪些?實驗所用主要為組織標本和細胞標本兩大類,前者包括石蠟切片(病理大片和組織芯片)和冰凍切片,后者包括組織印片、細胞爬片和細胞涂片。其中石蠟切片是制作組織標本最...
細胞增殖與毒性檢測實驗方法及經(jīng)驗總結(jié)-CCK-8 法2022/3/15
實驗原理:CellCountingKit-8(簡稱CCK-8)試劑可用于簡便而準確的細胞增殖和毒性分析。其基本原理為:該試劑中含有WST-8【化學名:2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯...
細胞轉(zhuǎn)染技術(shù)原理及應(yīng)用(瞬時轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染)2022/3/14
常規(guī)轉(zhuǎn)染技術(shù)可分為兩大類,一類是瞬時轉(zhuǎn)染,一類是穩(wěn)定轉(zhuǎn)染(永(jiu)轉(zhuǎn)染)。前者外源DNA/RNA不整合到宿主染色體中,因此一個宿主細胞中可存在多個拷貝數(shù),產(chǎn)生高水平的表達,但通常只持續(xù)幾天,多用于...
瞬時轉(zhuǎn)染分析法2022/3/14
摘要:介紹5種瞬時轉(zhuǎn)染分析法:瞬時轉(zhuǎn)染分析法、穩(wěn)定轉(zhuǎn)染分析法、體外轉(zhuǎn)錄分析法、轉(zhuǎn)基因分析法和同源重組分析法.1.瞬時轉(zhuǎn)染分析法目前有很多功能性分析方法用于研究轉(zhuǎn)錄調(diào)控尤為常用的方法是瞬時轉(zhuǎn)染分析法.該...
細胞瞬時轉(zhuǎn)染2022/3/14
摘要:通過脂質(zhì)體介導轉(zhuǎn)染法及電穿孔等基因轉(zhuǎn)染技術(shù),將靶基因?qū)爰毎?,一般在轉(zhuǎn)染后48小時左右,靶基因即可在細胞內(nèi)表達。根據(jù)不同的實驗?zāi)康模?8小時后即可進行靶基因表達的檢測等實驗。原理:通過脂質(zhì)體介導...
哺乳動物細胞瞬時基因轉(zhuǎn)移法制備重組蛋白實驗2022/3/14
材料與儀器步驟一、轉(zhuǎn)染方法對于脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染(Upofection),可以從商業(yè)途徑獲得許多配方,這些配方都具有單一的專(禾刂)化組分,而且毫無疑問,它們中的大部分都能非常有效地將質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)人細胞。其缺...
斑點濾膜結(jié)合法2022/3/14
原理材料與儀器待測蛋白質(zhì)樣品10%三氯醋酸(TCA)考馬斯亮藍凝膠染色液考馬斯亮藍凝膠脫色液Whatman3MM濾紙步驟1.用鉛筆在3mm濾紙上畫出1cmx1cm大小的方格;2.在每一方格中心加入3u...
T、B淋巴細胞分離2022/3/11
原理淋巴細胞與用溴花二氨基異硫氫化物(簡稱AET)處理的綿羊紅細胞(SRBC)混合后,其中全部T淋巴細胞均能吸附AET-SRBC,形成牢固穩(wěn)定而巨大的E-花環(huán),較正常未處理的SRBC形成的E-花環(huán)百分...
Real-time PCR實驗攻略(基本方法二)2022/3/11
材料與儀器一、關(guān)于TrizolReagent需要的試劑1.Chloroform:氯仿(分析純)2.Isoproplylalcohol:異丙醇(分析純)3.75%Ethanol(inDEPC-treat...
Real-time PCR實驗攻略(基本方法一)2022/3/11
材料與儀器步驟實時熒光定量PCR(Real-TimePCR)實驗流程一、RNA的提取(詳見RNA提取及反轉(zhuǎn)錄)不同組織樣本的RNA提取適用不同的提取方法,因為Real-TimePCR對RNA樣品的質(zhì)量...
實時熒光定量PCR技術(shù)2022/3/11
原理實時熒光定量PCR技術(shù),是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團,利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程,最后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。材料與儀器細胞樣品RNA提取試劑盒熒光定量PCRM...
補體介導法2022/3/11
原理帶有特異抗原的靶細胞(如正常細胞、腫瘤細胞、病毒感染細胞)與相應(yīng)抗體結(jié)合后,在補體的參與下,引起靶細胞膜損傷,導致細胞膜的通透性增加、細胞死亡。染料(例如:伊紅-Y、臺盼藍)可通過細胞膜進入細胞內(nèi)...
輔助方案 TCA 沉淀測定標記摻入量2022/3/10
原理材料與儀器被標記的細胞懸液(見基本方案或備擇方案1~4)0.1%(mV)BSA/0.02%(mV)NaN310%TCA溶液冷凍乙醇連接真空管道的濾過裝置2.5cm玻璃微纖維濾膜(WhatmanGF...
備擇方案 3 長期細胞標記2022/3/10
原理長期標記意味著對細胞進行6~32h持續(xù)的代謝標記。該方法特別適用于研究合成速度相對較慢的蛋白質(zhì)或研究成熟的標記蛋白而不是生物合成的前體。穩(wěn)定狀態(tài)的標記是長期標記的一種形式,在此過程細胞和放射性標記...
備擇方案 2 示蹤標記細胞2022/3/10
原理材料與儀器細胞懸液/貼壁細胞[35S]標記L-甲硫氨酸(800Ci/mmol)/[35S]標記蛋白質(zhì)水解產(chǎn)物PBS(冷凍)37℃示蹤培養(yǎng)基配有液體同位素垃圾閥門的真空吸氣器步驟1.每個時間點和每個...

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