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實時熒光定量PCR的優(yōu)化（三）2021/10/12
本期介紹設(shè)計引物，得到實時熒光PCR引物對，這種方法也可以用于普通PCR。1、長度應(yīng)該在18～30bp，保證結(jié)合的特異性。2、熔解溫度（Tm值）應(yīng)在55～60°C，兩條引物的Tm值應(yīng)相差2～3°C。3...
實時熒光定量PCR的優(yōu)化（二）2021/10/12
如果你所研究的靶序列有前人建立過實時熒光定量PCR的方法，就可以在公共數(shù)據(jù)庫中查找，查看擴(kuò)增效率、特異性、靈敏度等信息，省去從頭開始的時間。注意，使用前人建立的方法前，需要再次驗證這個方法的參數(shù)是不是...
實時熒光定量PCR的優(yōu)化（一）2021/10/12
如果是病毒定量和SNP基因分型的實時熒光定量PCR，我們需要盡可能高特異性；如果是病原體、mRNA檢測，我們需要高靈敏度。想要提高PCR擴(kuò)增效率、特異性及靈敏度，我們可以通過一系列措施優(yōu)化實時熒光定量...
qPCR實驗為什么要制作熔解曲線？2021/10/11
熒光DNA結(jié)合染料法的缺點是它們能在反應(yīng)中結(jié)合所有DNA雙鏈，包括在實時熒光PCR中產(chǎn)生的引物二聚體，和其他非特異性產(chǎn)物，引起大量的背景噪聲信號。這種噪聲會影響我們對靶基因產(chǎn)量的評估，甚至熒光強度和靶...
經(jīng)濟(jì)快捷的SNP位點研究方法-SNP基因分型2021/10/11
SNP，全稱SingleNucleotidePolymorphisms，是指在基因組上單個核苷酸的變異。目前很多人仍然使用測序法來進(jìn)行研究，具有準(zhǔn)確、直觀的優(yōu)點。但有一種方法，能間接的研究SNP，且經(jīng)...
生化轉(zhuǎn)染的另一種選擇，磷酸鈣介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染2021/10/11
磷酸鈣介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染方法應(yīng)用于將外源DNA轉(zhuǎn)入培養(yǎng)的細(xì)胞，已有45年以上的歷史。Graham和vanderEb在磷酸鈣存在下，將病毒DNA導(dǎo)入哺乳動物細(xì)胞的這一工作，為基因在多種哺乳動物細(xì)胞中進(jìn)行瞬時表達(dá)...
共轉(zhuǎn)化，篩選轉(zhuǎn)染細(xì)胞的實用工具2021/10/11
想要達(dá)到轉(zhuǎn)染的目的，即分析轉(zhuǎn)染基因的功能和表達(dá)，需要轉(zhuǎn)染的基因穩(wěn)定整合進(jìn)入宿主染色體。根據(jù)細(xì)胞類型，細(xì)胞群體中，最高有80%的細(xì)胞，以瞬時表達(dá)的方式表達(dá)轉(zhuǎn)染的基因。但對于穩(wěn)定轉(zhuǎn)染，好的情況，也只有1/...
如何提高磷酸鈣轉(zhuǎn)染的效率？2021/10/11
提高磷酸鈣轉(zhuǎn)染法效率的共通步驟，目的都是為了避免產(chǎn)生會被細(xì)胞內(nèi)吞、加工失效的大顆粒沉淀。提高轉(zhuǎn)染效率的操作有以下這些：1、將小分子DNA整合在高分子質(zhì)量基因組DNA上，以大分子作為運載體，能提高轉(zhuǎn)染效...
怎么提高電穿孔法轉(zhuǎn)染的效率？2021/10/9
電穿孔法難點在于提高電穿孔的效率。實驗操作者一般能從電轉(zhuǎn)儀廠家得到轉(zhuǎn)染的詳細(xì)方案和優(yōu)化指導(dǎo)。當(dāng)你需要自己優(yōu)化轉(zhuǎn)染效率時，可以從以下方面進(jìn)行：1、外加電場的強度：電壓過低，細(xì)胞膜不能形成小孔，使得外源分...
電穿孔法轉(zhuǎn)染如此“萬能”，為什么還要用其他方法？2021/10/9
同學(xué)們在進(jìn)行轉(zhuǎn)染時，肯定被各種各樣的轉(zhuǎn)染試劑挑花了眼吧。商業(yè)化的轉(zhuǎn)染試劑通常針對多重細(xì)胞類型、不同的核酸和各種特定的用途，也就是說，你要從種類繁多的試劑中挑選適合你的。這時候，電穿孔法轉(zhuǎn)染就進(jìn)入了我們...
我的脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染實驗效率低，怎么辦？2021/10/9
脂質(zhì)體介導(dǎo)轉(zhuǎn)染實驗指的是，脂質(zhì)包裹待轉(zhuǎn)染DNA形成復(fù)合體，與細(xì)胞膜融合或內(nèi)吞，進(jìn)入細(xì)胞。然而，大量的脂質(zhì)體-DNA復(fù)合體，只有一小部分能運送到細(xì)胞質(zhì)并進(jìn)入細(xì)胞核中。如何提高脂質(zhì)體介導(dǎo)轉(zhuǎn)染效率的關(guān)鍵，就...
脂質(zhì)介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染為什么是首先選的轉(zhuǎn)染方法？2021/10/9
在細(xì)胞轉(zhuǎn)染實驗中，我們常常要根據(jù)不同的實驗?zāi)康模D(zhuǎn)染細(xì)胞的不同，選擇我們將要使用的實驗方法。脂質(zhì)體介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染是我們的首先選擇，他具有易操作，重復(fù)性好，低毒性和適用于懸浮培養(yǎng)體系細(xì)胞的特點，在很多轉(zhuǎn)染方...
常用的卵巢癌細(xì)胞的培養(yǎng)及細(xì)胞表達(dá)2021/10/9
整理一篇關(guān)于卵巢癌細(xì)胞的培養(yǎng)方法和細(xì)胞的特征特點，由于卵巢癌早期缺少癥狀，即使有癥狀也不特異，篩查的作用又有限，因此早期診斷比較困難，就診時60%～70%已為晚期，而晚期病例又療效不佳，卵巢癌方向的研...
CCK-8，細(xì)胞增殖檢測較為合適的選擇2021/10/8
什么是細(xì)胞增殖檢測？細(xì)胞增殖是細(xì)胞在周期調(diào)控的因子下，通過DNA復(fù)制等反應(yīng)，完成細(xì)胞分裂的過程。在細(xì)胞增殖中，新細(xì)胞的產(chǎn)生過程影響著體內(nèi)所有組織的發(fā)育、生長和維持，同時，它也被嚴(yán)格調(diào)控著，以防失控的細(xì)...
實驗操作分享：干細(xì)胞誘導(dǎo)成骨實驗2021/10/8
間充質(zhì)干細(xì)胞屬于成體干細(xì)胞，可在體外通過不同的方法干預(yù)下下誘導(dǎo)分化為骨、軟骨及其他結(jié)締組織，因其來源廣泛，分離無創(chuàng)傷，較低的免疫原性、生長周期短等特點，是組織工程種子細(xì)胞的重要來源。干細(xì)胞的誘導(dǎo)分化一...
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