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2021
09-07

什么是原代細胞、細胞株、細胞系？
原代細胞(primarycell)是指從機體的組織(如人組織、小鼠組織、大鼠組織和兔組織等)經(jīng)蛋白酶或其它的方法獲得單個細胞并在體外進行模擬機體培養(yǎng)的細胞，稱為原代細胞。一般認為，培養(yǎng)的原代的第1代細...
2021
09-07

腫瘤原代細胞鑒定技術(shù)
一、形態(tài)學鑒定1.在倒置顯微鏡中直接觀察活細胞的形態(tài)學特征2.細胞染色檢查：a)將無菌玻片置于細胞培養(yǎng)皿中，加細胞懸液后培養(yǎng)；b)待細胞長滿玻片后取出，用PBS清洗，之后放于載玻片上，待其自然干燥；c...
2021
09-07

原代細胞計數(shù)技術(shù)
1、準備計數(shù)板：用酒精清潔計數(shù)板及專用蓋玻片，然后輕輕拭干。2、制備細胞懸液：用消化液分散單層培養(yǎng)細胞或直接收集懸浮培養(yǎng)細胞，制成單個細胞懸液。要求細胞密度不低于104/ml，若細胞數(shù)很少，應(yīng)將懸液離...
2021
09-07

原代細胞染色技術(shù)
一．臺盼藍染色（1）制備單個細胞懸液，并作適當稀釋（106細胞/ml)。（2）染色：取9滴細胞懸液移入小試管中，加一滴0.4%臺盼藍溶液，混勻。（3）計數(shù)：在3分鐘內(nèi)，用血球計數(shù)板分別計數(shù)活細胞和死細...
2021
09-07

原代細胞復(fù)蘇技術(shù)
1、取出細胞，迅速放入37℃溫水中快速解凍。2、吸出細胞懸液，并加10倍以上培養(yǎng)液。3、1000r/分鐘離心5分鐘，去除上清。4、用培養(yǎng)液適當稀釋后接種培養(yǎng)瓶，放入37℃CO2培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)。鏡檢細胞...
2021
09-06

原代細胞凍存技術(shù)
1、選用生長情況好，數(shù)量較多的原代細胞，凍存前一天換液一次。2、貼壁細胞需用0.25％胰酶常規(guī)消化將細胞消化下來，將細胞懸液收集至離心管中。3、1000rpm離心5分鐘，棄上清液。4、沉淀加含DMSO...
2021
09-06

原代細胞無血清培養(yǎng)技術(shù)
1、棄去培養(yǎng)基廢液。2、消化：加入1ml0.125％胰酶溶液，轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶使酶液浸沒瓶底，溫浴消化2-3分鐘。3、終止：用無血清培養(yǎng)基終止酶反應(yīng)。4、離心：收集中和了的培養(yǎng)液，于15ml的離心管中100...
2021
09-06

原代細胞傳代技術(shù)
一、貼壁細胞的消化法傳代1、吸除或倒掉瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液。2、加入1ml左右消化液（胰蛋白酶或與EDTA混合液）輕輕搖動培養(yǎng)瓶，使瓶底細胞都浸入溶液中。3、消化2-5分鐘后把培養(yǎng)瓶放置在顯微鏡下進行觀察，發(fā)...
2021
09-06

原代細胞培養(yǎng)技術(shù)
一、組織塊直接培養(yǎng)法1、取材，用Hank's液洗滌三次，并剔除脂肪，結(jié)締組織，血液等雜物。2、用手術(shù)剪將組織剪切成1mm3左右的小塊，再用Hank's液洗三次。3、將組織塊轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)瓶，并貼附于瓶底面...
2021
09-06

原代細胞鑒定技術(shù)
一、形態(tài)學鑒定1.在倒置顯微鏡中直接觀察活細胞的形態(tài)學特征2.細胞染色檢查：a)將無菌玻片置于細胞培養(yǎng)皿中，加細胞懸液后培養(yǎng)；b)待細胞長滿玻片后取出，用PBS清洗，之后放于載玻片上，待其自然干燥；c...
2021
08-30

原代細胞分離技術(shù)
取人或動物體內(nèi)（或胚胎）的組織，將其剪碎至1mm3的組織塊，再采用的如下方法進行分離培養(yǎng)：一、懸浮細胞的分離方法1、將血液、羊水、胸水或腹水等懸液直接轉(zhuǎn)至離心管中，1000rpm/分鐘離心5分鐘。2、...

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