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漲知識(shí) | qPCR專場(chǎng)二：如何獲取高質(zhì)量的cDNA模板？
熒光定量PCR是實(shí)驗(yàn)室中出鏡率非常高的一種檢測(cè)方法。該方法通過(guò)在PCR體系中添加熒光基團(tuán)來(lái)記錄DNA產(chǎn)物的累積情況，從而達(dá)到對(duì)PCR過(guò)程進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)控的目的，并且可以通過(guò)數(shù)據(jù)分析計(jì)算出起始模板量，這就是“熒光定量”中“定量”一詞的來(lái)源。熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)因?yàn)殪`敏度高所以經(jīng)常是差之毫厘謬以千里，所以在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，我們需要注意諸多細(xì)節(jié)，謹(jǐn)慎操作。小伙伴們看到這里就要著急了，我怎樣才能做好qPCR實(shí)驗(yàn)，拿到實(shí)驗(yàn)結(jié)果，發(fā)表高分文章，走上人生呢？對(duì)于熒光定量PCR反應(yīng)體系而言，cDNA模板的質(zhì)量至關(guān)重要。c -
克隆是英文“clone”或“cloning”的音譯，而英文“clone”則起源于希臘文“Klone”，原意是指以幼苗或嫩枝插條，以無(wú)性繁殖或營(yíng)養(yǎng)繁殖的方式培育植物，如扦插和嫁接。1963年J.B.S.Haldane在題為“人類種族在未來(lái)二萬(wàn)年的生物可能性”的演講上采用“克?。–lone）”的術(shù)語(yǔ)，把“克隆技術(shù)”帶到了人們的視野中，其本身的含義是無(wú)性繁殖?？寺〖夹g(shù)又稱為“生物放大技術(shù)”，它經(jīng)歷了三個(gè)發(fā)展時(shí)期：01微生物克隆時(shí)期即用一個(gè)細(xì)菌可以很快復(fù)制出成千上萬(wàn)個(gè)和它一模一樣的細(xì)菌，從而變成一個(gè)細(xì)菌
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Smart-seq3xpress：更低成本、更高通量的單細(xì)胞測(cè)序技術(shù)
單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測(cè)序可以研究細(xì)胞內(nèi)RNA轉(zhuǎn)錄本的異質(zhì)性和復(fù)雜性，揭示組織/器官/生物體內(nèi)不同細(xì)胞類型的組成和功能，目前在胚胎發(fā)育、細(xì)胞分化、神經(jīng)科學(xué)、腫瘤免疫等領(lǐng)域都有重要的應(yīng)用。基于SMART（Switchingmechanismatthe5′endoftheRNAtemplate）技術(shù)的Smart-seq2是主要的單細(xì)胞測(cè)序技術(shù)之一，具有高靈敏度、全長(zhǎng)轉(zhuǎn)錄本覆蓋度、可檢測(cè)到稀有轉(zhuǎn)錄本等特點(diǎn)，應(yīng)用場(chǎng)景廣泛。圖1.Smart-seq2技術(shù)流程圖[1]但基于平板的Smart-seq2技術(shù)，分析通量低且 -
護(hù)航全流程！宿主核酸殘留去除與檢測(cè)完整方案·背景介紹·近年來(lái)，生物制品已應(yīng)用到生物醫(yī)藥、生物農(nóng)業(yè)、生物能源、生物制造、生物環(huán)保等多種領(lǐng)域。隨著生物制品的市場(chǎng)占比越來(lái)越大，針對(duì)生物制品，國(guó)家和相關(guān)部門也建立起規(guī)范的質(zhì)量管理體系和標(biāo)準(zhǔn)，其中宿主細(xì)胞核酸殘留問(wèn)題是備受關(guān)注的焦點(diǎn)之一。生物制品如重組蛋白藥、抗體藥、疫苗、細(xì)胞與基因藥物等產(chǎn)品是用連續(xù)傳代的菌種株/細(xì)胞株表達(dá)的，因而產(chǎn)品內(nèi)可能會(huì)殘存宿主核酸。殘留的宿主細(xì)胞核酸可能引發(fā)細(xì)胞因增殖失控變?yōu)槟[瘤細(xì)胞，也有可能存在感染性病毒基因從而加劇體內(nèi)免疫反應(yīng)
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Exonuclease I：特異性去除單鏈DNA，PCR引物去除的選擇
核酸外切酶I（ExonucleaseI）是一種對(duì)變性或單鏈脫氧核糖核酸具有高度選擇性的核酸外切酶，作用時(shí)，ExonucleaseI從單鏈聚脫氧核糖核苷酸的3羥基端開(kāi)始攻擊，隨后逐步釋放出脫氧核糖核苷5'-單磷酸鹽，但末端二核苷酸會(huì)保持完整，對(duì)雙鏈DNA或RNA無(wú)活性。常用于在Sanger測(cè)序或SNP分析之前去除PCR反應(yīng)中的單鏈引物、去除巢式PCR中的單鏈引物、PCR產(chǎn)物酶法純化、從核酸混合物中去除含有3'羥基末端的單鏈DNA等。圖1.ExonucleaseI降解單鏈DNA示意圖翌圣的Exonu -
免費(fèi)試用 | 經(jīng)培養(yǎng)類器官驗(yàn)證的高活性HiActi™細(xì)胞因子
免費(fèi)試用|經(jīng)培養(yǎng)類器官驗(yàn)證的高活性HiActi™細(xì)胞因子2021年，類器官被列為“十四五”國(guó)家重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃重點(diǎn)專項(xiàng)。類器官如此火熱，其獲得方式也成為目前關(guān)注的焦點(diǎn)。不同類器官在培養(yǎng)過(guò)程中所需的細(xì)胞因子是不同的。通過(guò)添加促進(jìn)或抑制特定信號(hào)通路的細(xì)胞因子，可以讓干細(xì)胞分化成需要的類器官。類器官培養(yǎng)中的細(xì)胞因子培養(yǎng)方案為WNER（分別代表：Wnt-3a、Noggin、EGF和R-Spondins），這4種因子的增減組合可以適用于幾乎所有的類器官培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)。類器官培養(yǎng)常用細(xì)胞因子R-Spodin1功能：R -
組織/細(xì)胞RNA提取指南，擺脫選擇綜合征！核糖核酸（RNA），存在于生物細(xì)胞以及部分病毒、類病毒中的遺傳信息載體。RNA的堿基主要有4種，即A（腺嘌呤）、G（鳥(niǎo)嘌呤）、C（胞嘧啶）、U（尿嘧啶），其中，U（尿嘧啶）取代了DNA中的T（胸腺嘧啶）。核糖核酸在體內(nèi)的作用主要是引導(dǎo)蛋白質(zhì)的合成。圖1.DNA和RNA的結(jié)構(gòu)RNA的分類人體一個(gè)細(xì)胞含RNA約10pg（含DNA約7pg）。在細(xì)胞中，根據(jù)結(jié)構(gòu)功能的不同，RNA主要分三類，即tRNA（轉(zhuǎn)運(yùn)RNA），rRNA（核糖體RNA），mRNA（信使RNA
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精品推薦 | Hifair系列高效反轉(zhuǎn)錄試劑，助力合成高質(zhì)量cDNA
精品推薦|Hifair系列高效反轉(zhuǎn)錄試劑，助力合成高質(zhì)量cDNA如何做好反轉(zhuǎn)錄，拿到高質(zhì)量的cDNA，做出漂亮的實(shí)驗(yàn)結(jié)果呢？在這其中不僅僅要把控好操作的細(xì)節(jié)，選好適合的反轉(zhuǎn)錄試劑也很重要！翌圣反轉(zhuǎn)錄試劑類型目前翌圣匠心研發(fā)的反轉(zhuǎn)錄試劑大體分為兩類，分別為反轉(zhuǎn)錄試劑盒和反轉(zhuǎn)錄預(yù)混液。反轉(zhuǎn)錄試劑盒：產(chǎn)品中Oligodt引物和隨機(jī)引物單獨(dú)成管，可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求，引物靈活調(diào)整，針對(duì)特定基因片段、miRNA、siRNA等其他特殊目標(biāo)RNA時(shí)，可選用自己設(shè)計(jì)合成的特異性引物。反轉(zhuǎn)錄預(yù)混液：產(chǎn)品中Oligodt
