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凝膠過濾層析(GelFiltrationChromatography)也稱為分子篩或體積排阻層析(SizeExclusionChromatography)，是根據(jù)分子大小和形狀的差異進(jìn)行分離的一種簡(jiǎn)單可靠的層析技術(shù)。凝膠過濾層析屬于非吸附類層析。分離原理凝膠過濾填料為三維立體網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，由于凝膠網(wǎng)孔大小的限制，大分子將不能進(jìn)入凝膠顆粒內(nèi)部（即被凝膠排阻在外），僅能在凝膠顆粒間隙移動(dòng)，并隨緩沖液一起從柱底先行洗脫。小分子可以自由進(jìn)入并擴(kuò)散到凝膠顆粒內(nèi)部，小分子歷經(jīng)的路徑更長，將較晚從柱上洗脫。由于樣
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干貨│從原理到應(yīng)用，帶你全方面了解T4 gene 32 protein
T4噬菌體基因32編碼蛋白(T4gene32protein，gp32)是一種單鏈DNA（ssDNA）結(jié)合蛋白，為T4噬菌體DNA復(fù)制和修復(fù)所必需。它被廣泛地用于穩(wěn)定和標(biāo)記ssDNA區(qū)域，以便用電子顯微鏡觀察細(xì)胞內(nèi)DNA的結(jié)構(gòu)、促進(jìn)限制性內(nèi)切酶的消化反應(yīng)、提高RT-PCR中反轉(zhuǎn)錄的效率、增強(qiáng)T4DNA聚合酶的活性和提高PCR的產(chǎn)量等。T4gene32protein的結(jié)構(gòu)T4gene32protein由301個(gè)氨基酸組成，大小為34kDa，包含三個(gè)不同的結(jié)構(gòu)域：核心結(jié)構(gòu)域、N端結(jié)構(gòu)域（NTD）和C端 -
分子克隆作為分子生物學(xué)的一項(xiàng)成熟技術(shù)，幾乎每個(gè)實(shí)驗(yàn)室都或多或少的會(huì)涉及。在分子克隆實(shí)驗(yàn)中，限制性內(nèi)切酶是克隆產(chǎn)品，但大家也常常因?yàn)橄拗菩詢?nèi)切酶的各種問題而感到煩擾。比如小翌常被問到的：1.限制性內(nèi)切酶種類這么多，不知道如何選擇；2.酶切不完或出現(xiàn)亂切、錯(cuò)切的情況；3.酶切速度慢，需要1h甚至過夜酶；4.多酶切還需要選擇多款酶切緩沖液?！槍?duì)第1個(gè)問題，小翌會(huì)簡(jiǎn)單介紹一下什么是限制性內(nèi)切酶，不同內(nèi)切酶的分類如何，讓您對(duì)限制性內(nèi)切酶有一個(gè)更全面的認(rèn)識(shí)。針對(duì)第2~4個(gè)問題，翌圣FuniCut®系列快
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干貨 | 病毒滴度檢測(cè)，除了空斑試驗(yàn)還有更好的選擇
什么是病毒滴度呢？就像重組蛋白合成以后需要檢測(cè)純度一樣，病毒包裝后的效力如何，如何定量，也是必須要檢測(cè)的，專業(yè)術(shù)語稱為：病毒滴度的測(cè)定。病毒滴度是指單位體積液體中具有生物活性的病毒顆粒數(shù)，是衡量病毒數(shù)量和毒力的一個(gè)重要指標(biāo)。病毒滴度測(cè)定是指確定給定樣品中病毒顆粒的濃度的過程。它是評(píng)估病毒產(chǎn)品，如疫苗、基因治療載體或診斷試劑的質(zhì)量和效力的一個(gè)重要參數(shù)。病毒滴度檢測(cè)方法比較病毒滴度的測(cè)定方法有多種，主要分為物理方法和生物方法兩大類。物理方法是通過測(cè)定病毒顆粒的大小、形態(tài)、數(shù)量、電荷、光學(xué)性質(zhì)等，來推 -
CUT&Tag優(yōu)于ChIP-Seq的關(guān)鍵竟是它？
CUT&Tag優(yōu)于ChIP-Seq的關(guān)鍵竟是它？前面幾期，小翌介紹過“翌圣轉(zhuǎn)座酶系列產(chǎn)品助力NGS文庫構(gòu)建”（戳鏈接了解詳情）。本期，小翌重點(diǎn)聊聊pG-Tn5。什么是pG-Tn5pG-Tn5(pG-Tn5Transposase)是將ProteinG(pG)與經(jīng)過改造的Tn5轉(zhuǎn)座酶進(jìn)行融合，形成的同時(shí)具備轉(zhuǎn)座酶與ProteinG活性的新型融合酶。ProteinG能特異性與抗體結(jié)合，從而使得pG-Tn5具備更高的靶向性。Tn5是一種細(xì)菌轉(zhuǎn)座子,經(jīng)改造的Tn5能夠高效地切割DNA,同時(shí)連接上特定的接頭 -
巨噬細(xì)胞清除操作及文獻(xiàn)實(shí)例分析
01巨噬細(xì)胞清除簡(jiǎn)介巨噬細(xì)胞是體內(nèi)每個(gè)器官中都存在的細(xì)胞，存在于表皮、角膜和沒有血管的關(guān)節(jié)內(nèi)部，其體內(nèi)生物學(xué)研究的重要方法之一是巨噬細(xì)胞耗竭。清除巨噬細(xì)胞，可以全面了解巨噬細(xì)胞在病理?xiàng)l件下的功能。目前，巨噬細(xì)胞清除的主要方法包括構(gòu)建巨噬細(xì)胞缺失動(dòng)物模型和使用藥物（氯膦酸鹽脂質(zhì)體）去除法，但是，構(gòu)建巨噬細(xì)胞缺失動(dòng)物模型價(jià)格昂貴，周期長，因此，氯膦酸鹽脂質(zhì)體（ClodronateLiposomes）是目前最為成熟、方便、經(jīng)濟(jì)的一種巨噬細(xì)胞清除工具，可以有效的清除動(dòng)物體內(nèi)包括肝臟，脾臟，肺部，血液等多 -
精彩回顧 | 四企聯(lián)動(dòng)，共話病原快檢——高通量測(cè)序技術(shù)助力病原快檢與防控
精彩回顧|四企聯(lián)動(dòng)，共話病原快檢——高通量測(cè)序技術(shù)助力病原快檢與防控8月24日下午，由華大智造、吉因加、金匙醫(yī)學(xué)和翌圣生物聯(lián)合主辦的“四企聯(lián)動(dòng)，共話病原快檢——高通量測(cè)序技術(shù)助力病原快檢與防控”的云聽會(huì)落幕，這場(chǎng)齊聚設(shè)備商、服務(wù)商和原料商的研討會(huì)，從不同的視覺角度，為賦能病原領(lǐng)域的診斷和監(jiān)測(cè)等角度提供不同的病原快檢與防控見解，思想的碰撞為大家?guī)砹瞬≡鞕z前沿的新設(shè)備、新興技術(shù)和優(yōu)質(zhì)試劑。四企聯(lián)動(dòng)賦能病原快檢與防控華大智造DNBSEQ測(cè)序平臺(tái)加速病原檢測(cè)。華大智造帶來了全球同等通量測(cè)序儀中速度最 -
mRNA合成的關(guān)鍵步驟之一是將質(zhì)粒DNA進(jìn)行線性化，這一步需要使用限制性內(nèi)切酶，IIs型內(nèi)切酶是質(zhì)粒線性化的內(nèi)切酶，因?yàn)樗鼈冊(cè)谧R(shí)別位點(diǎn)下游切割DNA，可確保所設(shè)計(jì)的poly(A)尾的完整性，線性化后的DNA模板上不會(huì)留下“疤痕”，IVT過程中也不會(huì)添加不需要的核苷酸。BsaI是常見的IIs型內(nèi)切酶之一，在mRNA合作中起著重要作用。圖1.BsaI識(shí)別位點(diǎn)及切割序列翌圣GMP級(jí)別BsaI翌圣的BsaI由大腸桿菌重組表達(dá)，GMP標(biāo)準(zhǔn)生產(chǎn)，酶切效率高、星號(hào)活性低、末端完整性良好，可用于mRNA疫苗生產(chǎn)
