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qPCR常見問題及解決方案對于從事分子生物學(xué)研究的實驗猿來說，RT-qPCR實驗可謂是老生常談了。看似風(fēng)平浪靜，只需“RNA提取-反轉(zhuǎn)錄-熒光定量”這些按部就班的操作，實則險象環(huán)生，一丁點的出錯都有可能讓我們懷疑人生。即便如此，在CNS的召喚下我們?nèi)耘f一遍遍的重復(fù)、重復(fù)、再重復(fù)。小翊深有體會，為此嘔心瀝血整理出來常用的SYBRGreen染料法RT-qPCR實驗的幾個常見問題，并給出了可能的原因和解決方案，希望大家能夠順利度過RT-qPCR大關(guān)。RT-qPCR實驗中，大家或多或少會遇到擴(kuò)增曲線異常
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免疫球蛋白G（IgG）——模擬抗體活性，神似抗體結(jié)構(gòu)免疫球蛋白免疫球蛋白（Ig）指具有抗體（Ab）活性或化學(xué)結(jié)構(gòu)，與抗體分子相似的球蛋白。免疫球蛋白是由兩條相同的輕鏈和兩條相同的重鏈通過鏈間二硫鍵連接而成的四肽鏈結(jié)構(gòu)。免疫球蛋白分為五類，即免疫球蛋白G（IgG）、免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白M（IgM）、免疫球蛋白D（IgD）和免疫球蛋白E（IgE）。圖1五類免疫球蛋白結(jié)構(gòu)示意圖IgG簡介免疫球蛋白G（ImmunoglobulinG，IgG）是血清中免疫球蛋白主成分，約占血清中免疫球蛋白總
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轉(zhuǎn)鐵蛋白（Transferrin）——無血清細(xì)胞培養(yǎng)添加物
轉(zhuǎn)鐵蛋白（Transferrin）------無血清細(xì)胞培養(yǎng)添加物背景介紹轉(zhuǎn)鐵蛋白又名運鐵蛋白（Transferrin，TRF、Tf），負(fù)責(zé)運載由消化管吸收的鐵和由紅細(xì)胞降解釋放的鐵。以三價鐵復(fù)合物（Tf-Fe3+）的形式進(jìn)入骨髓中，供成熟紅細(xì)胞的生成。轉(zhuǎn)鐵蛋白主要存在于血漿中，血漿中的轉(zhuǎn)鐵蛋白供應(yīng)機(jī)體絕大部分組織的鐵，而在其不能到達(dá)的部位，由這些組織自己合成的轉(zhuǎn)鐵蛋白在局部產(chǎn)生轉(zhuǎn)鐵作用。圖1:轉(zhuǎn)鐵蛋白的結(jié)構(gòu)人轉(zhuǎn)鐵蛋白（HumanTransferrin）主要在肝臟合成，是由位于同源N-端和C-端 -
精品推薦：系列ECL化學(xué)發(fā)光試劑盒 ——點亮您的印跡膜，一觸即發(fā)！
搞事情啊，翊圣請來了四位ECL超級魔術(shù)師？？老板，都說你家ECL功能強(qiáng)，我給個飛克級的蛋白，能變出條帶嗎？辦不到？？老板，我多給點小費，把蛋白提高到皮克級，能不能變出條帶？還是辦不到？？那也太差勁了，還想不想混了！不，小伙，你理解錯了，是通通不是問題??！跟著我往下看！點亮您的印跡膜，一觸即發(fā)ECL試劑，即化學(xué)發(fā)光法辣根過氧化物酶（HRP）底物，是目前Westernblotting檢測中為靈敏的試劑。目前市場上普通ECL試劑在使用過程中經(jīng)常出現(xiàn)易淬滅、高背景、不穩(wěn)定以及低豐度蛋白難以檢測等問題，影 -
Yeasen第三代逆轉(zhuǎn)錄酶預(yù)混液，高質(zhì)量cDNA的*！
Hifair®Ⅲ1stStrandcDNASynthesisSuperMixforqPCR(gDNAdigesterplus)——Yeasen第三代逆轉(zhuǎn)錄酶預(yù)混液，高質(zhì)量cDNA的*！研發(fā)背景RT-qPCR是一個多步驟連貫實驗，逆轉(zhuǎn)錄的實驗結(jié)果只能通過后續(xù)qPCR進(jìn)行判定，因此這一過程的成功與否十分關(guān)鍵。實驗過程中，你是否有遇到過這些問題？1.逆轉(zhuǎn)錄效率低導(dǎo)致后續(xù)qPCR實驗結(jié)果Ct值偏大？2.RNA具有復(fù)雜二級結(jié)構(gòu)或GC含量高導(dǎo)致逆轉(zhuǎn)錄失?。?.逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)品組分多，加樣麻煩誤差還大？。。。。。。 -
化繁為簡！小翊帶你輕松搞定qPCR數(shù)據(jù)分析
化繁為簡！小翊帶你輕松搞定qPCR數(shù)據(jù)分析熒光定量PCR（qPCR）是實驗室常用的一種技術(shù)，該技術(shù)可以應(yīng)用于基因表達(dá)分析、基因分型、病原體檢測、SNP分析等。qPCR實驗操作簡單，原理易懂，但面對一堆凌亂的數(shù)據(jù)，如何進(jìn)行結(jié)果分析成了頭疼的問題，今天小翊將帶你學(xué)會如何化繁為簡，輕松獲得可以發(fā)表SCI的數(shù)據(jù)！qPCR常用的分析方法有相對定量和定量，需根據(jù)不同的實驗設(shè)計進(jìn)行選擇。本期我們關(guān)注的是qPCR常見的應(yīng)用—基因表達(dá)分析，一般選擇相對定量法。1.實驗設(shè)計假設(shè)目前需要研究光誘導(dǎo)對擬南芥AtSUC2 -
產(chǎn)品信息產(chǎn)品名稱產(chǎn)品編號規(guī)格儲存價格Live&DeadBacterialStainingKit活細(xì)菌/死細(xì)菌染色試劑盒40274ES60100T4℃避光保存3683.00產(chǎn)品描述試劑盒內(nèi)含兩種熒光染料DMAO和EthD-III，可分別將活細(xì)菌和死細(xì)菌染上綠色和紅色。其中DMAO是一種綠色核酸熒光染料，可染色活細(xì)菌和死細(xì)菌。EthD-III是一種紅色核酸熒光染料，僅染色細(xì)胞膜受損的死細(xì)菌。將DMAO和EthD-III混合使用染色時具有完整細(xì)胞膜的細(xì)菌呈現(xiàn)綠色，而具有受損細(xì)胞膜的細(xì)菌呈現(xiàn)綠色和紅色。
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活死細(xì)菌、細(xì)胞檢測-----探尋生命的奧秘背景介紹真核生物（哺乳動物細(xì)胞）和原核生物（細(xì)菌）細(xì)胞增殖和細(xì)胞死亡間平衡對維持細(xì)胞有機(jī)的發(fā)育與生命的維持至關(guān)重要，如果出現(xiàn)失衡將導(dǎo)致各種疾病的發(fā)生?；钏罓顟B(tài)是研究生物增殖生長的常見研究目的，例如；對于真核活死細(xì)胞主要通過分析細(xì)胞質(zhì)膜完整性與細(xì)胞內(nèi)酯酶活性，經(jīng)過特定儀器觀察判斷，為研究細(xì)胞狀態(tài)提供了一種方便的方法，同時分析活細(xì)胞與死細(xì)胞，用于評估細(xì)胞的活力?？梢詰?yīng)用于大多數(shù)的真核哺乳動物細(xì)胞，但不適用于真菌和酵母。主要對于藥物研究、毒性判定、細(xì)胞生長狀態(tài)
