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一、WesternBlot實(shí)驗(yàn)原理蛋白免疫印跡（WesternBlot，WB）是將蛋白質(zhì)經(jīng)電泳分離后轉(zhuǎn)移到膜上，然后利用抗體進(jìn)行檢測(cè)的技術(shù)。完整的WB流程，如下圖所示，包含樣本制備、SDS-PAGE、轉(zhuǎn)膜、抗體結(jié)合、蛋白檢測(cè)等5個(gè)大步驟。二、試劑準(zhǔn)備詳見文末附錄。三、實(shí)驗(yàn)步驟1.樣本制備1）融解RIPA裂解液，混勻。取適當(dāng)量的裂解液，在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入PMSF，使PMSF的zui終濃度為1mM。2）貼壁細(xì)胞：去除培養(yǎng)液，用PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍。按照6孔板每孔加入150-250μ
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1.什么是RIPA裂解液？RIPA裂解液（RadioImmunoprecipitationAssayLysisbuffer，放射免疫沉淀法裂解緩沖液）是一種傳統(tǒng)的可用于裂解細(xì)胞或組織的快速裂解液，其原理為利用表面活性劑等裂解細(xì)胞膜（包括核膜），從組織或細(xì)胞中抽取可溶性蛋白。RIPA裂解液裂解后得到的蛋白一般可直接用于常規(guī)的WB、IP、co-IP等實(shí)驗(yàn)。2.RIPA裂解液里有什么？RIPA裂解液的配制方法有很多種，主要包括裂解成分、蛋白酶抑制劑和磷酸酶抑制劑三種組分。裂解成分可通過破壞細(xì)胞膜和蛋白
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BenzonaseNuclease高活力核酸酶——消滅核酸，拒絕污染1.前言核酸污染是生物樣本制備中常常遇到的問題。在蛋白純化的過程中，如果您提取的蛋白粘度很高、蛋白純化的得率很低、蛋白檢測(cè)的結(jié)果很差，那么您的樣本可能遭受了核酸污染。如何去除核酸？超聲法和DNase/RNase酶法是常用的方法，但存在諸多缺陷（表1）。表1核酸去除，超聲法與DNase/RNase酶法優(yōu)缺點(diǎn)超聲法DNase/RNase酶法優(yōu)點(diǎn)利用剪切力可在一定程度上降解核酸利用核酸內(nèi)切酶活性，可在溫和條件下，較好的消化核酸缺點(diǎn)僅能
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YeaRed無毒核酸染料，您的安全科研助手還有實(shí)驗(yàn)室用EB嗎？拒絕EB！用無毒核酸染料YeaRed！溴化乙錠（Ethidiumbromide，EB）是應(yīng)用早的的核酸染料，并且由于其價(jià)格便宜、靈敏度高，早期被實(shí)驗(yàn)者廣泛應(yīng)用。但其分子量小，很輕易就能穿透細(xì)胞膜，屬于誘變劑，具有高致癌性，對(duì)人體潛在危害非常大。實(shí)驗(yàn)者使用時(shí)需要謹(jǐn)慎再謹(jǐn)慎，另外，單獨(dú)的EB區(qū)占用了實(shí)驗(yàn)室的大塊空間，廢膠、廢液的處理費(fèi)時(shí)、費(fèi)力又費(fèi)錢，以及不小心碰到EB區(qū)的東西可能再也不能重見天日了，真是讓人又愛又恨。隨著技術(shù)的發(fā)展，人們對(duì)
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PeptideHydrogelSuitablefor3DCellCulture——3D多肽水凝膠超越基質(zhì)膠（matrigel）Yeasen多肽水凝膠產(chǎn)品是由一種由16個(gè)氨基酸組成的多肽，在鹽離子存在情況下自發(fā)組裝成的水凝膠支架結(jié)構(gòu)。多肽的大小通常在5nm左右，是親水性和疏水性氨基酸殘基交替排列組成的兩性分子肽段，能形成折疊片結(jié)構(gòu)，并自組裝形成納米纖維，這些納米纖維相互交織在一起形成基質(zhì)并進(jìn)一步形成含水量超過99.5%的水凝膠支架（見圖1）。Yeasen多肽水凝膠無需通過調(diào)節(jié)聚合物和交聯(lián)劑的量來獲
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關(guān)鍵詞：ChromoTek、GFP、RFP、免疫沉淀、IP、抗體、瓊脂糖、磁珠德國(guó)ChromoTek公司成立于2008年，擁有德國(guó)制造的良好質(zhì)量，致力于細(xì)胞生物學(xué)和蛋白質(zhì)組學(xué)的研發(fā)與研究，公司擁有強(qiáng)大的研發(fā)團(tuán)隊(duì)，有*生物制劑，主要使命是花費(fèi)較少的時(shí)間和成本，使客戶獲得得高質(zhì)量的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。產(chǎn)品包括單克隆抗體、重組單域抗體、熒光抗體、GFP或RFP連接蛋白等。德國(guó)ChromoTek是一家專業(yè)研發(fā)生產(chǎn)標(biāo)簽抗體的公司，利用羊駝抗體的特異性解決了傳統(tǒng)GFP/RFP抗體分子量過大、轉(zhuǎn)染表達(dá)效率低的問題，研發(fā)
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關(guān)鍵詞：ChromoTek、GFP、RFP、免疫沉淀、IP、抗體、瓊脂糖、磁珠*（ChromotekGFP-Traps已被600多篇同行評(píng)議的近期文獻(xiàn)引用）產(chǎn)品名稱產(chǎn)品貨號(hào)規(guī)格報(bào)價(jià)（元）*（元）GFP-Trap®_A,coupledtoagarosegta-2020rxns(500µl)63003300GFP-Trap用于免疫沉淀（IP）德國(guó)ChromoTek是一家專業(yè)研發(fā)生產(chǎn)標(biāo)簽抗體的公司，利用羊駝抗體的特異性解決了傳統(tǒng)GFP/RFP抗體分子量過大、轉(zhuǎn)染表達(dá)效率低的問題，研發(fā)出分子量只有15k
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單克隆抗體生產(chǎn)相關(guān)載體--pEE系列
單克隆抗體生產(chǎn)相關(guān)載體--pEE系列pEE系列載體是Lonza生物公司研發(fā)的GlutamineSynthetase(GS,谷氨酰胺合成酶)基因表達(dá)系統(tǒng)，利用谷氨酰胺合成酶篩選標(biāo)記，能夠高水平的在哺乳細(xì)胞內(nèi)表達(dá)目的基因，zui常用的有pEE6.4和pEE12.4表達(dá)載體。GS酶是生物體內(nèi)以谷氨酸和氨為底物合成谷氨酰胺的酶。GS酶的活性能夠被甲硫氨酸砜亞胺（methioninesulphoximine，MSX）選擇性的抑制。一些哺乳動(dòng)物細(xì)胞，例如小鼠骨髓瘤細(xì)胞(NSO細(xì)胞系)無法表達(dá)GS，所以在不添
