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qPCR進(jìn)階攻略—帶你玩轉(zhuǎn)儀器設(shè)置
熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)是分子實(shí)驗(yàn)室常用的一項(xiàng)技術(shù)。持續(xù)關(guān)注小翊的應(yīng)該都掌握了高質(zhì)量cDNA的獲取方法，引物設(shè)計(jì)指南以及反應(yīng)體系的配制技巧（還未get的小伙伴戳文末鏈接），然而上機(jī)時(shí)，發(fā)現(xiàn)和別人的反應(yīng)條件不一致卻又不敢動(dòng)儀器？本期小翊將帶你玩轉(zhuǎn)qPCR儀器的設(shè)置！目前市面上的qPCR儀器種類五花八門，但基本上儀器的設(shè)置都相對(duì)一致。我們以ABI7500為例進(jìn)行介紹。反應(yīng)板設(shè)置實(shí)驗(yàn)?zāi)康倪x擇：我們將實(shí)驗(yàn)命名為“Yeasen”，進(jìn)行“Quantitation：ΔΔCt”實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)方法選擇：如選用SYBRGre -
dsDNAHSAssayKitforQubit®——給我5min，還你一個(gè)準(zhǔn)確定量結(jié)果1產(chǎn)品概述dsDNAAssayKitforQubit®是Yeasen生物開發(fā)的專門用于Qubit®熒光儀或熒光酶標(biāo)儀的試劑盒，線性范圍0.2-100ng，即使在存在ssDNA、RNA和單體核苷酸的條件下，也可以選擇性的檢測(cè)dsDNA，且耐受較高濃度的蛋白質(zhì)、鹽類、洗滌劑等污染物。2產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)1）操作簡(jiǎn)便——5min之內(nèi)出結(jié)果2）高選擇性——對(duì)dsDNA具有高度選擇性，不定量RNA和ssDNA。圖dsDNAAssa
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遺傳中心法則表明，DNA是生物體內(nèi)遺傳信息的載體。遺傳信息在精密的調(diào)控下從DNA轉(zhuǎn)錄成RNA，再傳遞到蛋白質(zhì)。因此RNA被認(rèn)為是DNA與蛋白質(zhì)之間生物信息傳遞的“橋梁”，在研究轉(zhuǎn)錄組信息中占有著重大的作用。背景介紹轉(zhuǎn)錄組（transcriptome）是指在某一特定的生理?xiàng)l件下，細(xì)胞、組織或者生物體內(nèi)所有的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的集合，即轉(zhuǎn)錄出來的所有RNA總和，包括編碼RNA（即mRNA）和ncRNA（tRNA、rRNA、miRNA、lncRNA、circRNA）等不同類型的RNA分子。在這之中核糖體RNA(
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RNA文庫建的好，輕松完成轉(zhuǎn)錄組測(cè)序分析不是夢(mèng)
常規(guī)轉(zhuǎn)錄組測(cè)序（RNA-Seq）主要是在轉(zhuǎn)錄水平上對(duì)逆轉(zhuǎn)錄的cDNA進(jìn)行NGS測(cè)序，這樣可以全面快速地獲取某一物種在某一狀態(tài)下的幾乎所有轉(zhuǎn)錄本，包括mRNA和非編碼RNA。目前轉(zhuǎn)錄組測(cè)序主流的方法是芯片法和RNA-Seq法。RNA-Seq相較于芯片法優(yōu)勢(shì)明顯，如：不受物種限制通量高靈敏度高分辨率高同時(shí)能夠檢測(cè)未知基因，發(fā)現(xiàn)新的轉(zhuǎn)錄本并準(zhǔn)確地識(shí)別可變剪切位點(diǎn)及SNP、UTR區(qū)域等。此次疫情爆發(fā)，溯源工作主要是依靠這種方法。圖1常規(guī)RNA-Seq建庫流程精品推薦mRNA建庫試劑盒（適用Illumin -
背景介紹熒光素酶生物檢測(cè)技術(shù)誕生于1990年，已有供了更可靠的研究30年的發(fā)展史。單熒光素酶檢測(cè)系統(tǒng)到雙熒光素酶檢測(cè)系統(tǒng)的發(fā)展，為科研人員提供了更為嚴(yán)謹(jǐn)?shù)膶?shí)驗(yàn)手段。雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)系統(tǒng)在原有的基礎(chǔ)上引入了海腎報(bào)告基因，可以排除不同組之間細(xì)胞生長(zhǎng)狀況、細(xì)胞數(shù)目以及轉(zhuǎn)染效率帶來的干擾，起到校正的作用，從而使實(shí)驗(yàn)結(jié)果更為可靠。其發(fā)光原理如下圖1。圖1雙熒光素酶發(fā)光原理實(shí)驗(yàn)方案將靶基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控元件或5’啟動(dòng)子區(qū)克隆在Fireflyluciferase基因的上游，或把3’-UTR區(qū)或lncRNA結(jié)
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用數(shù)據(jù)說話，教你做雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)
你是否正在驗(yàn)證miRNA與lncRNA的作用機(jī)制？是否在分析確認(rèn)miRNA的靶基因？在研究轉(zhuǎn)錄因子和啟動(dòng)子的實(shí)驗(yàn)中，你是否想確定結(jié)合位點(diǎn)的序列？這些問題都可以用雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)系統(tǒng)來嘗試解決。雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)系統(tǒng)介紹基于熒光素酶（luciferase）的發(fā)光原理，科學(xué)家發(fā)明了雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)系統(tǒng)。該系統(tǒng)包括螢火蟲熒光素酶（Fireflyluciferase）和海腎熒光素酶（Renillaluciferase）。兩者可催化各自的底物發(fā)生氧化作用產(chǎn)生生物熒光，產(chǎn)生的熒光數(shù)值大小即表 -
翊圣生物提供高成功率糖尿病建模用STZ：純度≥98%（HPLC測(cè)定）。產(chǎn)品名稱貨號(hào)規(guī)格*（元）Streptozocin鏈脲佐菌素60256ES60100mg156.00Streptozocin鏈脲佐菌素60256ES76500mg386.00Streptozocin鏈脲佐菌素60256ES801g676.00文章包含以下知識(shí)點(diǎn)1.STZ誘導(dǎo)糖尿病模型的構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)SOP2.STZ誘導(dǎo)糖尿病模型建模效果評(píng)估指標(biāo)3.STZ誘導(dǎo)糖尿病模型的失敗原因解析4.STZ誘導(dǎo)小/大鼠死亡率高的原因解析5.糖尿病建模
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■什么是FFPE？FFPE（Formalin-FixedａndParrffinEmbedded），即福爾馬林固定石蠟包埋樣本。由于這種處理方法能夠較長(zhǎng)時(shí)間地保存組織或制備檢驗(yàn)所需的組織標(biāo)本，所以在臨床病理檢驗(yàn)、腫瘤基因檢測(cè)中應(yīng)用廣泛。在世界范圍內(nèi)，大約有數(shù)十億份組織樣品保存在醫(yī)院或者組織樣品庫中，其中絕大多數(shù)是使用福爾馬林固定石蠟包埋的方法處理的樣品。FFPE樣本通常代表了珍貴且來源廣泛的生物醫(yī)學(xué)研究材料，為闡明疾病機(jī)制、回顧性研究等提供了寶貴的資源，但是由于樣本制備以及儲(chǔ)存等多方面的原因，F(xiàn)F
